圖 1. 在 SH-SY5Y 成神經(jīng)細胞瘤細胞模型中，mTOR 抑制劑 PP242 可影響細胞健康。將 SH-SY5Y 膠質母細胞瘤細胞接種到 96 孔板中（5,000 個細胞/孔），在含 Incucyte^? Annexin V NIR (0.5%; artorius) 的培養(yǎng)基中培養(yǎng) 3 天后，用 mTOR 抑制劑 PP242 (50-0.21 μM) 處理。使用 Incucyte^?實時活細胞分析系統(tǒng)實時獲取相位和熒光圖像。典型圖片顯示了用 PP242 (16.7 μM) 和溶劑分別處理 72 小時后的比較結果。時間進程和藥物反應曲線顯示，細胞匯合度呈濃度依賴性下降，細胞死亡相應增加 (pIC50 4.8)。數(shù)據(jù)表示為平均值 ± SEM（3 次重復測定）。

圖 2. 實體腦腫瘤 3D 腫瘤球生長速度和面積的形態(tài)學差異。將成神經(jīng)細胞瘤 (SH-SY5Y) 和成膠質細胞瘤 (U87-MG) 細胞分別接種到 96 孔圓底孔板中（5,000 細胞/孔），然后等待細胞形成單腫瘤球（3 天）。在 Incucyte^?中監(jiān)檢測腫瘤球的形成和生長 10 天。圖 (A) 中顯示了腫瘤球形成 7 天后的代表性的明場圖像和分割 mask（藍色輪廓）。圖 (B) 中顯示了腫瘤球形成后的時間進程曲線圖，表明兩種細胞腫瘤球的生長速度和面積有所不同，SH-SY5Y 的面積略大于 U87，面積分別為 6.6 × 105 μm2 和 5.0 × 105 μm2。圖 (C) 中顯示了量化后的單球體偏心率，結果表明：U87 腫瘤球一經(jīng)形成，即呈現(xiàn)圓球狀、緊湊且保持低偏心率（第 1 天為 0.33，第 7 天為 0.31），而 SH-SY5Y 腫瘤球偏心率較高（第 1 天為 0.55，第 7 天為 0.78），隨著時間的推移，細胞增殖，腫瘤球的密實程度有所下降。數(shù)據(jù)表示為平均值 ± SEM（12 次重復測定）。

圖 3. 人源成膠質細胞瘤 U87 單球模型的驗證和穩(wěn)定性。(A) 將穩(wěn)定表達 Incucyte^? Nuclight-Orange 的 U87-MG 細胞以不同的密度（1,000-7,500 細胞/孔）接種到 96 孔板中，并在 Incucyte^? 中監(jiān)測其形成情況 3 天。(B) 使用橙色熒光數(shù)值觀察到接種的高度穩(wěn)定性和球體區(qū)域的密度依賴性差異。數(shù)據(jù)表示為平均值 ± SEM，并顯示 CV% 值。(C) 細胞接種并形成單球體后的明場和橙色熒光圖像（7,500 細胞/孔，3 天），并使用橙色分割 mask（紅色輪廓）。

圖 4.化療化合物在細胞抑制和細胞毒性作用方面的差異。將成膠質細胞瘤 (U87-MG) 細胞接種到 96 孔圓底孔板（5,000 細胞/孔）中，等待細胞形成腫瘤球（3 天），在 Incucyte^? 中監(jiān)測 10 天。(A) 腫瘤球形成后，在Incucyte^? Annexin V NIR ?存在的情況下，使用 DNA 抑制劑 Cisplatin (0.82 - 200 μM) 或雙重 mTOR 抑制劑 PP242 (0.21 - 50 μM) 處理細胞。(B) 時間進程曲線顯示了在明場區(qū)域中，腫瘤球在 Cisplatin (200 μM) 和 PP242 (50 μM) 的最高濃度下，相較溶劑空白組的變化。(C) 時間進程數(shù)據(jù)和藥物反應曲線表明，PP242 具有很強的細胞抑制作用，但只有在較高濃度下才會發(fā)生細胞凋亡，而 Cisplatin 則表現(xiàn)出較高的細胞毒性。數(shù)據(jù)表示為平均值 ± SEM。

圖 5. 高通量研究化合物對成膠質細胞瘤腫瘤球侵襲的影響。將 U87-MG 細胞接種到 ?96 孔圓底板中（2,500 細胞/孔），等待其形成腫瘤球（3 天）。然后用一系列稀釋的抗轉移化合物處理腫瘤球，并將其埋入 Matrigel (4.5 mg/mL) 以誘導侵襲（長達 10 天）。(A) Incucyte^?微孔板圖中顯示了3天處理后對腫瘤球侵襲的結果（整個腫瘤球區(qū)域；黃色輪廓 mask）。(B) 細胞松弛素 D (2.34 nM - 300 nM) 和 PP242 (0.01 μM - 30 μM) 對 U87-MG 腫瘤球侵襲的抑制呈濃度依賴性，而 Blebbistatin (0.01 μ M - 30 μ M) 對 U87-MG 腫瘤球侵襲的抑制作用不大。