抗體篩選
想要成功進行抗體發(fā)現(xiàn)，快速識別和表征與靶點反應的候選分子是關(guān)鍵。本案例研究展示了 iQue?高通量流式細胞儀在靶細胞系建立、小鼠血清評估和雜交瘤細胞文庫篩選中的應用。
抗體篩選應用
快速評估經(jīng)細胞表面靶抗原轉(zhuǎn)染的克隆。選擇靶抗原高水平表達的健康克隆，確保下游雜交瘤細胞篩選的理想結(jié)果。
提高生產(chǎn)率
400 個工程細胞克隆用于高表達靶抗原的篩選。
在 1 小時內(nèi)完成 5塊 96 孔板的運行和分析。
功能強大的多重篩選分析
基于細胞的多重分析可在可一步篩選出健康生長且高表達表面抗原的細胞系。
快速方便、可視化的結(jié)果
使用 Profile Map 實現(xiàn)高水平表達靶抗原和高細胞數(shù)量的克隆的可視化。
靶細胞系建立的篩選結(jié)果可視化
使用 ForeCyt?軟件進行篩選結(jié)果的可視化。細胞經(jīng)慢病毒編碼靶抗原轉(zhuǎn)導后，在選定的壓力下培養(yǎng)，并分類保存至 96 孔板中。待細胞生長后，將等份細胞轉(zhuǎn)移到檢測板上，在 iQue?高通量流式細胞儀上使用該抗原的特異性熒光標記抗體檢測表面抗原的表達，同時測定細胞數(shù)量，作為細胞生長的指標。
Profile Map 顯示，含有大量細胞的加樣孔中，細胞表面靶抗原高水平表達。
孔板視圖顯示了細胞表面靶抗原表達水平的詳細信息。疊加未轉(zhuǎn)染的對照細胞表達的數(shù)據(jù)可直觀顯示陽性克隆。
需進行大規(guī)模基于細胞的實驗，以識別產(chǎn)生高水平靶抗原特異性抗體的免疫小鼠。同時檢測幾十只免疫小鼠的血清可提高產(chǎn)生最佳抗體反應性雜交瘤細胞的成功率。
提高生產(chǎn)率
對 36 只免疫小鼠的血清進行細胞表面靶抗原結(jié)合檢測。
將免疫前和免疫后的小鼠血清稀釋 8 倍，進行重復檢測。
功能強大的多重篩選分析
基于細胞多重分析可一步篩選出與靶抗原結(jié)合（而不結(jié)合其他抗原）的血清。
快速方便、可視化的結(jié)果
使用熱圖可視化處理含有結(jié)合靶抗原（而不結(jié)合其他抗原）的高滴度抗體的小鼠血清。
小鼠血清評估篩選結(jié)果的可視化
使用 ForeCyt?中的 HeatMap 功能將檢測結(jié)果進行可視化處理。采用細胞熒光編碼染料將 3 個細胞系進行染色編碼，混合后轉(zhuǎn)移至 384 孔板中。將血清樣品加入到每個孔中，然后采用熒光檢測抗體，通過 iQue? 高通量流式細胞儀對孔板進行分析。對 36 只小鼠免疫前和免疫后的血清進行 8 倍稀釋，然后進行重復檢測。
HeatMap 顯示了抗體與對照細胞、表達靶抗原的細胞和表達不相關(guān)抗原的細胞結(jié)合的結(jié)果。
一種高通量的多重篩選，可同時進行多個靶抗原（對照抗原除外）的結(jié)合檢測。整個篩選和數(shù)據(jù)分析過程可在一天內(nèi)完成。
提高產(chǎn)率
從 2 只不同的免疫小鼠中篩選出 9600 個雜交瘤細胞克隆。
可在 1 天內(nèi)完成 25 × 384 孔板的運行和分析。
功能強大的多重篩選分析
基于細胞多重分析可一步篩選出與靶抗原結(jié)合（而不結(jié)合其他抗原）的抗體。
快速方便、可視化的結(jié)果
28800 個數(shù)據(jù)點可立即組合和處理到結(jié)合指標中。
可觀察到 53 個與靶抗原（而非對照抗原）結(jié)合的結(jié)果。
雜交瘤細胞文庫篩選結(jié)果的可視化
使用 ForeCyt?中的 Panorama 功能將整個篩選結(jié)果進行可視化處理。采用熒光細胞編碼器染料將 3 個細胞系進行熒光編碼，混合后加樣至 384 孔板的孔中。在每個加樣孔中加入雜交瘤細胞上清液，然后進行抗體熒光檢測。使用靶抗原表達細胞檢測從 2 只不同的免疫小鼠的 9600 個雜交瘤克隆。整個篩選過程可在一天內(nèi)完成。
HeatMap（紅色）顯示了抗體與對照細胞、表達靶抗原的細胞和表達有聯(lián)系但不相關(guān)抗原的細胞結(jié)合的結(jié)果。
Profile Map（藍色）將結(jié)合結(jié)果與三種類型細胞進行合并，顯示了與靶抗原表達細胞結(jié)合的抗體，但與不相關(guān)抗原表達或陰性對照細胞不結(jié)合的抗體。
抗體篩選資源
推薦資源
iQue?高通量流式細胞儀優(yōu)勢
使用 ForeCyt ?軟件的 Profile Map 功能篩選具有所需特征的抗體克隆。
