守護您的稀有細胞：無論分離或染色，確保無細胞丟失
SIEVEWELL 納米孔芯片引領基于納米孔的單細胞分離進入新時代。SIEVEWELL 是一款全新設計的腔室載玻片，其液體腔室底部有額外的納米孔結(jié)構(gòu)。這些納米孔每個孔的底部都有 2 個微孔，與下面的一個小液體微腔相連。這樣可以捕捉納米孔內(nèi)的細胞，并從液室頂部產(chǎn)生單向流動，通過孔隙進入下方的液體微腔。得益于這一設計，用戶不僅可以在納米孔中分隔并捕獲單細胞，還可以在孔內(nèi)直接對這些細胞進行處理，例如抗體標記、單細胞染色、清洗等，無懼丟失任何細胞。這種完全無細胞損失的芯片上處理方式使SIEVEWELL 技術成為稀有單細胞應用的高效之選，可用于分離循環(huán)腫瘤細胞、胎兒細胞等。
通過將這種獨特的芯片設計與 CellCelector相結(jié)合，可以實現(xiàn)全自動化的單細胞鑒定，并可100%分離出所需的靶細胞。
SIEVEWELL：技術細節(jié)和特征
設計
- 標準顯微鏡載玻片規(guī)格
- 良好的生物相容性，非細胞毒性材料
- 帶納米孔的薄膜
- 超低吸附表面
- 納米孔尺寸：20 μm 寬 x 25 μm 深。非常適合高效的單細胞捕獲。
每個芯片具有37萬個納米孔（17 x 17毫米）
- 六邊形設計的納米孔是自動化細胞檢測和細胞計數(shù)的理想選擇
- 每個納米孔底部有兩個直徑為 2 μm 的微孔，易于通過液體，同時有效地保留細胞
SIEVEWELL 薄膜結(jié)構(gòu)。納米孔的俯視圖。
SIEVEWELL 薄膜結(jié)構(gòu)。納米孔的側(cè)視圖。
SIEVEWELL 的明場圖像。納米孔底部的孔隙清晰可見。
SIEVEWELL 納米孔芯片的光學性質(zhì)
- 在顯微鏡明場下呈現(xiàn)高透明度
- 自發(fā)熒光信號極低
得益于這些優(yōu)勢，SIEVEWELL 技術非常適合于顯微鏡和光學測量，并且可以采集高質(zhì)量的顯微成像數(shù)據(jù)。
SIEVEWELL：工作原理
SIEVEWELL 芯片共有 37 萬個納米孔，其中每個孔的底部有兩個直徑為 2 μm 的微孔。它們連接芯片上方和下方的流體部分。納米孔下方的流體通過位于芯片膜下方的一個液體微腔連接到兩側(cè)端口。
將細胞懸液接種到芯片上后，可以通過用標準的微量移液器抽吸液體來產(chǎn)生和控制從內(nèi)部液室到側(cè)端口的單向流體流。這些細胞將跟隨液體流動并被滯留在納米孔中。當一個細胞進入納米孔時，它會堵塞微孔，從而減少通過納米孔的液體流量。因此，其他細胞將自動重定向到其他空的納米孔，從而實現(xiàn)自隔離納米孔陣列。細胞裝載完成后，可以使用相同的方式對芯片進行染色，確保在固定、破膜、封閉、孵育和洗滌過程中不會造成任何的細胞損失。
SIEVEWELL 無損單細胞分離的芯片染色工作流程
1.?填裝細胞
將富集或處理過的單細胞懸液接種到芯片中。SIEVEWELL 技術可兼容活細胞和固定細胞。
第 1 步
將單細胞懸液加入 SIEVEWELL 芯片的腔室中。
第 2 步
從 SIEVEWELL 芯片的側(cè)端口吸出緩沖液。
使用移液器進行抽吸，產(chǎn)生從內(nèi)部腔室流出的定向液流，并通過納米孔底部的兩個微孔，流向側(cè)端口的移液器。
細胞隨著液流向下移動，由于微孔足夠小，可以避免細胞通過，因此細胞將在納米孔內(nèi)被捕獲。
由于納米孔的大小限制，每孔只能捕獲一個細胞。細胞在進入納米孔后堵塞微孔，減少了液流通過。因此，后續(xù)的細胞將自動重定向到周圍的、空的納米孔中，從而實現(xiàn)非常高效的自分選單細胞捕獲。
接種至 SIEVEWELL 的 A549 細胞
2. 細胞染色和清洗
加入試劑、孵育、洗滌，細胞染色不丟失。在染色前也可以在裝置內(nèi)先進行固定。
第 1 步
將試劑或清洗液加入 SIEVEWELL 芯片的腔室中。
使用 CellCelector 進行掃描
藍色：DAPI；綠色：A549 細胞；紅色：Namalwa 細胞
納米孔中捕獲的 CTC
第 2 步
從 SIEVEWELL 芯片的側(cè)端口吸出過量的試劑或洗滌緩沖液。細胞被納米孔捕獲，在整個流程中不會丟失。
洗滌后的熒光圖像。
3. 檢測
使用 CellCelector 掃描芯片以檢測靶細胞。細胞固定在納米孔中，并在掃描過程中保持其原始位置。
由于 SIEVEWELL 芯片高度平整，因此用戶可以在不失焦的同時輕松地掃描芯片的整個區(qū)域。
用 CellCelector 進行掃描
藍色：DAPI；綠色：A549 細胞；紅色：Namalwa 細胞
納米孔中捕獲的 CTC
4. 靶細胞回收
將靶細胞轉(zhuǎn)移至 PCR 管或細胞培養(yǎng)板中。SIEVEWELL 納米孔芯片經(jīng)過專門優(yōu)化，可與全自動無損細胞分離系統(tǒng) CellCelector 配合使用。
使用 CellCelector 回收單細胞
分離至目的孔中的 A549 細胞
5. 下游分析
SIEVEWELL 技術兼容單細胞 DNA 二代測序、RNA 測序等分子生物學分析方法。回收后的活細胞可克隆。
使用 GAPDH 的基因特異性引物進行單細胞 RT-PCR。
PC：陽性對照，收集 A549 細胞的 c-DNA
NC：陰性對照，裂解緩沖液
相關參考文獻
- Ladurner M. et al. Validation of Cell-Free RNA and Circulating Tumor Cells for Molecular Marker Analysis in Metastatic Prostate Cancer Biomedicines. 2021 Aug 12;9(8):1004
