細(xì)胞吞噬作用 - Incucyte^?吞噬作用分析

細(xì)胞吞噬作用和胞葬作用

巨噬細(xì)胞等吞噬免疫細(xì)胞的關(guān)鍵功能是對(duì)患病或?yàn)l死細(xì)胞的吞噬作用。通過(guò)吞噬作用清除死亡細(xì)胞或凋亡細(xì)胞，稱(chēng)之為胞葬作用。胞葬作用對(duì)于解決炎癥發(fā)作（例如去除炎癥后持續(xù)存在的中性粒細(xì)胞）和預(yù)防慢性炎癥或自身免疫性疾病（例如 COPD、哮喘、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、纖維化和動(dòng)脈粥樣硬化）至關(guān)重要。胞葬作用也是在抗癌藥物治療后有效去除凋亡腫瘤細(xì)胞的關(guān)鍵，可確保細(xì)胞內(nèi)容物被包裹并避免不必要的炎癥反應(yīng)。

癌細(xì)胞不需要死亡就能被吞噬細(xì)胞清除。通過(guò)可與吞噬細(xì)胞結(jié)合的藥物標(biāo)記細(xì)胞的方法，藥物可以靶向腫瘤細(xì)胞，促進(jìn)吞噬細(xì)胞的攝取和清除。利妥昔單抗（一種靶向 B 細(xì)胞的抗 CD20 單克隆抗體）等抗體的添加可以觸發(fā)抗體依賴(lài)性細(xì)胞吞噬作用 (ADCP)。另一種類(lèi)似的策略是使用抗體來(lái)阻斷“don’t eat me”（別吃我）信號(hào)（腫瘤細(xì)胞利用該機(jī)制逃避清除，例如 CD47）的表達(dá)?？?CD47 抗體可阻斷該信號(hào)，使吞噬細(xì)胞能夠識(shí)別并清除癌細(xì)胞。

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活細(xì)胞分析手冊(cè)：第6版

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將活細(xì)胞分析和流式細(xì)胞儀結(jié)合到單一工作流程中，深入了解免疫細(xì)胞的殺傷機(jī)理。

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應(yīng)用

Incucyte^? 活細(xì)胞分析系統(tǒng)可在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行實(shí)時(shí)自動(dòng)化的細(xì)胞吞噬作用和胞葬作用分析。

在整個(gè)分析過(guò)程中對(duì)細(xì)胞的吞噬作用進(jìn)行自動(dòng)定量分析。選擇使用配備有效 pH 敏感性探針（用于細(xì)胞吞噬作用的 Incucyte^?pHrodo^? 紅色細(xì)胞標(biāo)記試劑）標(biāo)記的靶細(xì)胞，實(shí)時(shí)測(cè)定細(xì)胞吞噬。使用 Incucyte^? 高清相位對(duì)比圖像確定吞噬信號(hào)，直接觀察細(xì)胞吞噬情況。

非常適用于：

篩選可抑制/活化胞葬作用的化合物
定量分析抗體介導(dǎo)的細(xì)胞吞噬作用（例如，抗 CD47 抗體介導(dǎo)的吞噬作用或 ADCP）

視頻：使用 Incucyte^? 活細(xì)胞分析系統(tǒng)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)凋亡細(xì)胞的吞噬作用。采用 Incucyte^? 系統(tǒng)獲取的延時(shí)視頻實(shí)時(shí)顯示了 J774A.1 型小鼠巨噬細(xì)胞吞噬帶有 Incucyte^? pHrodo^? 紅色標(biāo)記的凋亡 Jurkat T 淋巴細(xì)胞。凋亡 Jurkat 細(xì)胞在被吞噬并進(jìn)入吞噬體的酸性環(huán)境中后，熒光增加。Incucyte^? 集成圖像分析工具能夠在整個(gè)分析過(guò)程中分析和測(cè)定紅色熒光信號(hào)。

檢測(cè)原理

將巨噬細(xì)胞（例如 J774A.1 小鼠巨噬細(xì)胞）或其他吞噬細(xì)胞接種到 96 或 384 孔板中。

通過(guò)用于細(xì)胞吞噬作用的 Incucyte^? pHrodo^? 紅色細(xì)胞標(biāo)記試劑盒標(biāo)記凋亡的靶細(xì)胞（例如中性粒細(xì)胞、Jurkats），然后將靶細(xì)胞添加至微孔板并實(shí)時(shí)測(cè)定吞噬細(xì)胞攝取靶細(xì)胞的情況

細(xì)胞熒光增加表明靶細(xì)胞已內(nèi)化至吞噬體中。Incucyte^? 自動(dòng)圖像分析可實(shí)現(xiàn)細(xì)胞吞噬作用隨時(shí)間變化的定量分析。

關(guān)鍵優(yōu)勢(shì)

Key Advantages

采用延時(shí)成像觀察和定量細(xì)胞的吞噬作用
采用延時(shí)成像觀察和定量細(xì)胞的吞噬作用
簡(jiǎn)單的即混即讀 96/384 孔板方案，無(wú)需細(xì)胞清洗、固定和分離操作
以靈活的檢測(cè)方式進(jìn)行相關(guān)測(cè)定
Incucyte^? pHrodo^? 紅色細(xì)胞標(biāo)記試劑盒可兼容您選定的吞噬細(xì)胞/靶細(xì)胞

采用延時(shí)成像觀察和定量吞噬作用

直觀的 Incucyte^? 圖像分析工具可實(shí)時(shí)觀察和檢測(cè)吞噬作用。利用圖像和視頻驗(yàn)證處理效果
pHrodo 熒光信號(hào)僅在靶細(xì)胞已內(nèi)化時(shí)才會(huì)出現(xiàn)，消除了虛假信號(hào)的風(fēng)險(xiǎn)

圖 1. 使用圖像和視頻觀察并驗(yàn)證細(xì)胞的吞噬作用（胞葬作用）。 ?延時(shí)圖像顯示，J774A.1 小鼠巨噬細(xì)胞在 24 小時(shí)內(nèi)吞噬了 Incucyte^? pHrodo^? 紅色細(xì)胞標(biāo)記試劑盒標(biāo)記的凋亡 Jurkats 細(xì)胞。熒光信號(hào)與吞噬作用相關(guān)的表型變化建立了關(guān)聯(lián)。我們使用 Incucyte^? 圖像分析工具定量分析胞葬作用，該軟件方便易用，可針對(duì)被吞噬的凋亡細(xì)胞直接進(jìn)行基于圖像的檢測(cè)（藍(lán)色 mask）。

在整個(gè)時(shí)間進(jìn)程中進(jìn)行自動(dòng)分析

在無(wú)需將細(xì)胞從培養(yǎng)箱的穩(wěn)定環(huán)境中取出的前提下，確定處理效果如何及何時(shí)發(fā)生。

圖 2.自動(dòng)、非侵入性地定量處理效果。96/384 孔板中每個(gè)孔的自動(dòng)成像和分析，提供胞葬作用隨時(shí)間變化的微孔板讀數(shù)（左圖）。時(shí)間進(jìn)程圖顯示處理效果呈濃度依賴(lài)性（中間圖）。將數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化為濃度響應(yīng)曲線，比較藥理學(xué)結(jié)果（右圖）。

簡(jiǎn)單的 96/384 孔板方案，無(wú)需細(xì)胞清洗、固定和分離操作

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圖 3. 快速指南。1) 在 96 孔板中接種吞噬細(xì)胞（例如 J774A.1，1-10 K/孔）。培養(yǎng)過(guò)夜（50 μL/孔）。2) 在吞噬作用前，用化合物處理效應(yīng)細(xì)胞（0.5-24 小時(shí)預(yù)處理，25 μL/孔）。3) 將 Incucyte^? pHrodo 標(biāo)記的靶細(xì)胞加入預(yù)處理過(guò)的孔中（10 μL/孔，25 μL/孔）。4) 在 Incucyte^? 系統(tǒng)中，每 10-20 分鐘（20× 或 10×）采集圖像，持續(xù) 2-18 小時(shí)。使用集成軟件進(jìn)行分析。

以靈活的檢測(cè)方式進(jìn)行相關(guān)測(cè)定

使用選定的吞噬細(xì)胞和靶細(xì)胞檢測(cè)對(duì)患病、死亡或?yàn)l死細(xì)胞的吞噬作用。研究抗體介導(dǎo)的細(xì)胞吞噬作用（例如，抗 CD47 抗體介導(dǎo)的吞噬作用/ADCP）或胞葬作用（對(duì)凋亡細(xì)胞的吞噬作用）。

圖 2. 靈活選擇靶細(xì)胞和效應(yīng)細(xì)胞。使用 Incucyte^? pHrodo^? 紅色細(xì)胞標(biāo)記試劑盒標(biāo)記活性 T 淋巴母細(xì)胞 CCRF-CEM，然后將其暴露于抗 CD47 單克隆抗體或 IgG 同型對(duì)照中?？?CD47 抗體與 CCRF-CEM 細(xì)胞上的“don’t eat me”（別吃我）信號(hào)相結(jié)合，促進(jìn)巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的吞噬作用。在抗 CD47 抗體存在的情況下，靶細(xì)胞被來(lái)源于骨髓的巨噬細(xì)胞吞噬，使熒光信號(hào)增加并呈現(xiàn)出濃度依賴(lài)性效應(yīng)。同型對(duì)照 IgG 在所有測(cè)試濃度下均對(duì)吞噬作用沒(méi)有影響。

常見(jiàn)問(wèn)題解答

細(xì)胞吞噬作用常見(jiàn)問(wèn)題解答

我需要表征數(shù)種不同的巨噬細(xì)胞系，找到吞噬作用基線率最高的細(xì)胞系。我應(yīng)該如何開(kāi)始比較不同巨噬細(xì)胞系的吞噬作用？

比較不同巨噬細(xì)胞系的吞噬能力需要穩(wěn)定和可重現(xiàn)的培養(yǎng)條件，和對(duì)吞噬活動(dòng)的頻繁監(jiān)測(cè)。吞噬作用競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)可作為很好的起始方法，該實(shí)驗(yàn)使用經(jīng)過(guò) pH 敏感性染料處理的引誘物或靶細(xì)胞，定期比較包含熒光的吞噬體數(shù)量。活細(xì)胞分析平臺(tái)可在不干擾培養(yǎng)系統(tǒng)的情況下進(jìn)行定期成像，能為需要頻繁監(jiān)測(cè)和成像的分析帶來(lái)優(yōu)勢(shì)。

了解有關(guān)分析巨噬細(xì)胞吞噬作用的詳細(xì)信息

什么是胞葬作用，它與吞噬作用有何不同？可以采用吞噬作用的分析研究中性粒細(xì)胞的胞葬作用嗎？

胞葬作用是描述死亡或凋亡細(xì)胞吞噬作用的術(shù)語(yǔ)，區(qū)別于活細(xì)胞、細(xì)胞碎片或其他碎片的吞噬作用。因此，吞噬作用分析可以檢測(cè)中性粒細(xì)胞和任何其他吞噬細(xì)胞類(lèi)型中的胞葬作用。

我們實(shí)驗(yàn)室采用吞噬作用分析作為誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞活化的主要篩選方法，但該方法高度依賴(lài)于最終用戶(hù)。如何實(shí)現(xiàn)吞噬作用分析的標(biāo)準(zhǔn)化，以提高數(shù)據(jù)的可靠性？

與任何基于活體生物的分析一樣，我們無(wú)法控制每個(gè)影響因素，但通過(guò)在培養(yǎng)箱內(nèi)的活細(xì)胞分析方法實(shí)現(xiàn)吞噬作用分析的標(biāo)準(zhǔn)化，可以幫助您消除差異的主要來(lái)源 - 節(jié)省微孔板在培養(yǎng)箱外成像的大量時(shí)間。活細(xì)胞分析可對(duì)巨噬細(xì)胞的吞噬作用進(jìn)行定期和全面的分析，無(wú)需手動(dòng)操作。

在吞噬作用分析中，被吞噬的靶細(xì)胞是否有大小限制？靶細(xì)胞是否需要低于特定的尺寸閾值？

一般來(lái)說(shuō)，吞噬作用的速度和效率與被吞噬目標(biāo)的大小和形狀相關(guān)，活動(dòng)的吞噬細(xì)胞會(huì)試圖吞噬途中的任何物質(zhì)。除非靶細(xì)胞異常大或形狀異常，否則在為吞噬作用分析選擇靶細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞的大小或形狀沒(méi)有實(shí)際限制。

可以在吞噬作用分析中對(duì)溶酶體不足的巨噬細(xì)胞進(jìn)行吞噬作用評(píng)估嗎？

如果吞噬作用分析完全建立在目視觀察上，則該分析適用于溶酶體不足的巨噬細(xì)胞的吞噬作用研究。然而，由于大多數(shù)其他吞噬作用分析依賴(lài)于吞噬體與內(nèi)體腔融合后發(fā)生 pH 變化導(dǎo)致的顏色變化，因此溶酶體不足的巨噬細(xì)胞可能無(wú)法提供有意義的數(shù)據(jù)。在這種情況下，應(yīng)通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定用于巨噬細(xì)胞吞噬作用的 pH 敏感性指示劑的值。