Incucyte^? CytoATP 慢病毒試劑適用于多種細胞類型，可直接測量活細胞中的胞質 ATP。

圖 1. 對活細胞進行高效、無干擾的標記，能夠直接測量胞質 ATP。

用 Incucyte^? CytoATP 慢病毒感染 HeLa 細胞并進行嘌呤霉素篩選以得到穩(wěn)定表達的細胞群。與親代細胞相比，表達 CytoATP 的細胞的形態(tài) (A) 和增殖 (B) 無變化。(C) 將穩(wěn)定表達 CytoATP 的 HeLa 細胞以 4,000 個細胞/孔接種到 96 孔微孔板中，并用 2-脫氧-D-葡萄糖 (2DG) 和氰化鉀 (KCN) 進行聯合處理。對 3 小時內捕獲的 CytoATP 熒光圖像進行定量，結果顯示，由于同時發(fā)生糖酵解和氧化磷酸化阻斷而導致 ATP 呈濃度依賴性快速耗竭。

圖 2. 在單一培養(yǎng)或先進的細胞模型中區(qū)在分特定細胞類型中對 ATP 的影響。在存在或不存在 CCD14086SK 成纖維細胞的條件下，接種三陰性乳腺癌 (TNBC) 細胞系 HCC1806 和穩(wěn)定表達 CytoATP 或 CytoATP 非結合對照的受體陽性乳腺癌細胞系 MCF7（8000 個細胞/孔）。使用集成式 Incucyte^? ATP 分析軟件模塊鑒別 ATP 的細胞變化（色標遮蔽）。遮蔽后的圖像 (A) 提供了在單一培養(yǎng)物以及與 CCD14086SK 細胞的共培養(yǎng)物中經 1 μM CB-839 處理的 HCC1806 細胞中 ATP 的可視化。動力學數據顯示，與單一培養(yǎng)物中生長的 MCF-7（受體陽性細胞系）(C) 相比，CB-839 處理后 TNBC 細胞系中 ATP 的耗竭更持久 (B)。然而，與基質細胞的共培養(yǎng)物介導了 TNBC 細胞中對 CB-839 的抗性，而受體陽性細胞系則未表現出不同的影響。IC50 曲線顯示出時間點 72 h (B) 和 15 h (C) 的數據。

生成實時代謝數據，以便更深入地了解對治療產生響應的短期和長期 ATP 動力學。

圖 3. 通過對 ATP 進行無損、重復測量，區(qū)分有絲分裂毒性化合物與細胞毒性化合物。穩(wěn)定表達 CytoATP 或非結合對照的 NIH 3T3 細胞在標準條件（葡萄糖）或含有替代葡萄糖的半乳糖的生長培養(yǎng)基（半乳糖）中生長，以推動能量代謝對氧化磷酸化的依賴。在 96 孔微孔板中以 12,000 個細胞/孔的密度接種細胞，并用無毒化合物（安貝生坦）、細胞毒性化合物（氯丙嗪）或有絲分裂毒性化合物（奈法唑酮）進行處理的熒光圖像（10 倍）。動力學數據顯示，在經細胞毒性或有絲分裂毒性化合物處理的細胞中，ATP 迅速耗竭。雖然在兩種培養(yǎng)基條件下對細胞毒性化合物的響應相似，但是在半乳糖中生長的細胞中，奈法唑酮的 IC50 向左偏移，表明存在線粒體毒性。在早期時間點觀察到更高的分離度，表明動力學 CytoATP 數據有助于更深入地評價化合物特征。

將細胞形態(tài)的變化與 ATP 代謝相關聯，以揭示細胞行為的信息、時間變化。

圖 4. 使用 HD 相圖，能夠對細胞形態(tài)進行定性檢查。將穩(wěn)定表達 CytoATP 或非結合對照的 HeLa 細胞以 2000–8000 個細胞/孔的密度接種到 96 孔微孔板中，用氯丙嗪 (60 μM)、依托泊苷 (100 μM) 或 2DG (20 mM) + KCN (2 mM) 進行處理，這些化合物耗竭 ATP 且效應隨時間變化，如動力學結果所突出顯示的（插圖）。在耗竭過程中采集的細胞 HD 相圖（10 倍）顯示，與溶媒對照相比，經氯丙嗪 (21 h) 和依托泊苷 (75 h) 處理的細胞形態(tài)發(fā)生了巨大變化，而經 2DG + KCN (60 min) 處理的細胞則未表現出顯著的形態(tài)變化。

了解更多信息