在單個(gè)孔中對(duì)一組抗體進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)化測(cè)定，實(shí)現(xiàn)高通量抗體發(fā)現(xiàn)

圖 2.使用 iQue^? Forecyt^? 高效評(píng)估抗體活性。

抗體內(nèi)化檢測(cè)使用了 T 細(xì)胞，在 384 孔板的每個(gè)孔中均生成了豐富的數(shù)據(jù)。使用抗體內(nèi)化試劑標(biāo)記了多種抗體，然后在同一孔中與 T 細(xì)胞共孵育。(A) 基于孔板的 T 細(xì)胞中不同抗體內(nèi)化的 HeatMap，便于查看。(B) 系列稀釋曲線呈現(xiàn)了 T 細(xì)胞中多種標(biāo)記抗體的內(nèi)化曲線。

在 96 孔或 384 孔板中使用經(jīng)驗(yàn)證的試劑快速定量 ADCP，促進(jìn)您的發(fā)現(xiàn)。

圖 3.非貼壁細(xì)胞和貼壁細(xì)胞類型的功能篩選和活性分析。

只需微調(diào)方案即可將該檢測(cè)方法用于貼壁細(xì)胞。圖中數(shù)據(jù)顯示了兩種治療性抗體（分別是懸浮 Ramos 細(xì)胞中的美羅華（抗 CD20）和貼壁 AU565 細(xì)胞中的赫賽汀（抗 Her2））濃度與活性的關(guān)系，以及同時(shí)評(píng)估的細(xì)胞活力。將細(xì)胞接種到 96 孔板中，并加入 ABI 試劑和抗體復(fù)合物以及 iQue^? 細(xì)胞膜完整性染料，然后孵育 3 小時(shí)。懸浮細(xì)胞可以直接在 iQue^? 平臺(tái)上分析，而貼壁細(xì)胞需要在分析前仔細(xì)分離并重新懸浮。

快速、輕松地收集、分析和展示復(fù)雜數(shù)據(jù)，加快科學(xué)決策

圖 4.Her2+ AU565 和 Her2- MDA-MB 468 細(xì)胞中的赫賽汀抗體內(nèi)化。

將細(xì)胞接種到 96 孔板中，并使用與赫賽汀類型不同的抗體和 ABI 試劑（A：AU565，B：MDA-MB-468）的復(fù)合物進(jìn)行處理。未在 Her2 細(xì)胞中檢測(cè)到內(nèi)化。 還對(duì) AU565 中的赫賽汀進(jìn)行了梯度稀釋曲線測(cè)定 (C)，顯示出不同的活性。

同時(shí)對(duì)在單個(gè)孔中共培養(yǎng)的不同表型細(xì)胞進(jìn)行特定抗體內(nèi)化評(píng)估

圖 5.通過對(duì)在單個(gè)孔中共培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行內(nèi)化分析，僅需少量樣品即可獲得可靠數(shù)據(jù)。

將細(xì)胞接種到 96 孔板之前，使用不同濃度的無干擾型 iQue^? 細(xì)胞編碼染料（V/藍(lán)色）對(duì)細(xì)胞染色。將單獨(dú)培養(yǎng)的細(xì)胞和共培養(yǎng)的細(xì)胞放置一夜，使細(xì)胞貼壁。加入赫賽汀或 hIgG1 與抗體內(nèi)化試劑的復(fù)合物，3 小時(shí)后使用 iQue^? 平臺(tái)執(zhí)行分析。通過散點(diǎn)圖 (A)，可以根據(jù)編碼染料輕松識(shí)別在同一孔中混合的全部三種細(xì)胞。可以對(duì)每個(gè)細(xì)胞群 (B) 執(zhí)行內(nèi)化評(píng)估，盡可能從檢測(cè)抗體中獲取信息，同時(shí)最大程度地減少珍貴樣品和檢測(cè)抗體用量。

圖 6.簡(jiǎn)單易用的 iQue^? 抗體內(nèi)化分析試劑盒的示意圖。

該分析試劑盒包含 3 種組分，每種均為 10 μL：已標(biāo)記的檢測(cè)抗體、細(xì)胞（可選紫色編碼）和 iQue^? 細(xì)胞膜完整性染料（B/綠色）。以 3 倍濃度制備每種組分，然后添加使終濃度達(dá)到 1 倍，檢測(cè)體積是 30 μL。

標(biāo)記步驟可以在適合早期雜交瘤篩選的完全培養(yǎng)基中輕松完成，所需抗體量很少。用戶可以在多種細(xì)胞中檢測(cè)抗體，進(jìn)行多重篩選，從而獲得內(nèi)化和細(xì)胞健康數(shù)據(jù)。